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论文解读--比较两种DNA疫苗在激情乱伦类诺卡氏菌病的保护率

出处:水生动物健康评估公众号 作者:王文基 天天影院天天影视网 2020-01-14 12:17:00

激情乱伦诺卡氏菌是一种广泛存在于水环境中的放线菌,感染激情乱伦后可导致皮肤溃疡,鳃、头肾、体肾、脾、肝等部位出现大量白色结节状结构。到目前为止,已经从病激情乱伦中分离出三种致病的诺卡氏菌,包括星状诺卡氏菌,鰤激情乱伦诺卡氏菌和杀鲑诺卡氏菌。值得注意的是,鰤激情乱伦诺卡氏菌是近年来激情乱伦诺卡菌病分离最频繁的病原菌,已被鉴定为激情乱伦诺卡菌病的主要病原菌。对于该病的治疗,目前尚没有有效的治疗措施,基本通过药物的预防和抗生素治疗。相比之下,疫苗在天天影院天天影视中具有安全性、环境友好性和长期有效性保护方面的优势。今天给大家介绍鰤激情乱伦诺卡氏菌中两种潜在的DNA疫苗对于预防诺卡氏菌病的效果,文章引用信息如下:
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本研究利用鸟枪法质谱(MS)技术,从鰤激情乱伦诺卡氏菌胞外产物中鉴定了DnaK和GroEL的分泌蛋白。DnaK和GroEL属于热休克蛋白家族(HSPs),也分别被称为Hsp70和Hsp60。几乎所有细菌中都存在DnaK和GroEL的同源物,它们在调节细胞内蛋白折叠以保证其正常功能方面起着关键作用。此外,越来越多的证据表明,来自不同致病菌的细胞外DnaK和GroEL蛋白在宿主体内起保护和调节作用免疫反应。文章研制了DnaK和GroEL两种DNA疫苗,并对其保护效果在杂交黑激情乱伦进行了研究与比较。

文章技术路线如下:
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结果:
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结果表明,从鰤激情乱伦诺卡氏菌序列中推断出的DnaK蛋白的氨基酸序列在细菌中具有高度的同源性,与N. niigatensis序列的同源性为97.88%,与大肠杆菌相似度为60.54%。GroEL与N. niigatensis的同源性为99.07%到与大肠杆菌的同源性为60.72%。系统进化树表明,鰤激情乱伦诺卡氏菌的DnaK和GroEL蛋白序列与N. niigatensis聚为一支,表明它们在功能上可能有相似作用。
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采用RT-PCR方法,对接种后激情乱伦的肌肉、头肾、脾脏和肝脏中DnaK和GroEL基因的转录进行分析。,分别。在这些组织中,DnaK和GroEL基因的转录均在7d.p.v.首次检测到,pcDNADnaK组和pcDNA-GroEL组在35 d.p.v.内连续检测到,而PBS组和pcDNA组未检测到。
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图3 接种黑激情乱伦血清非特异性参数
血清LYZ、POD、ACP、AKP和SOD活性的非特异性参数升高提示,pcDNA-DnaK和pcDNAGroEL DNA疫苗均可诱导杂交黑激情乱伦产生非特异性免疫应答。
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图4 用酶联免疫吸附法(ELISA)测定杂交黑激情乱伦血清中细粒棘球蚴特异性抗体(IgM)水平

与PBS组和pcDNA组相比,pcDNA- dnak组和pcDNA- groel组IgM水平均较高,接种后第1周至第5周差异极显著(p < 0.01)。pcDNA-GroEL DNA疫苗诱导的特异性抗体(IgM)峰值水平高于pcDNA-DnaK DNA疫苗。
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图5 免疫相关基因表达的qRT-PCR分析

结果表明,pcDNA- dnak组和pcDNA- groel组与PBS组和pcDNA组相比,免疫相关基因的表达水平均有显著提高。
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图6 用pcDNADnaK、pcDNA- groel、pcDNA或PBS接种的杂交黑激情乱伦经过N. seriolae ZJ0503的攻毒试验14 d后的存活率

pcDNA- Dnak和pcDNA- Groel接种组的杂交黑激情乱伦成活率分别为74.00%和89.33%,pcDNA和PBS接种组的累积成活率分别为45.33%和44.67%。接种pcDNA、pcDNADnaK和pcDNA- groel的杂交黑激情乱伦的RPS分别为1.19%、53.01%和80.71%。

本研究对pcDNA-DnaK和pcDNA-GroEL DNA疫苗诱导的免疫应答进行了研究,并比较了这两种DNA疫苗对杂交黑激情乱伦N. seriolae感染的保护作用。pcDNA-DnaK和pcDNA-GroEL DNA疫苗均可促进先天应答、体液免疫应答和细胞免疫应答,说明DnaK和GroEL是有希望的激情乱伦类诺卡菌病候选疫苗,这些发现将促进激情乱伦类诺卡菌病疫苗的开发。

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